Tris Acetate-EDTA buffer

Il tampone Tris Acetato-EDTA (TAE) è un reagente fondamentale nella ricerca in biologia molecolare, utilizzato principalmente nell'elettroforesi degli acidi nucleici e nell'analisi su gel di DNA/RNA. Questo tampone è formulato meticolosamente per fornire le condizioni ottimali per la separazione e la visualizzazione dei frammenti di acido nucleico in base alle dimensioni. La composizione del tampone TAE comprende in genere tre componenti principali: Tris(idrossimetil)aminometano (Tris), acido acetico (acetato) e acido etilendiamminotetraacetico (EDTA). Il Tris funge da agente tampone, mantenendo un pH stabile intorno a 8,0, che favorisce la stabilità e l'elettroforesi di DNA e RNA. L'acido acetico agisce come controione, fornendo conducibilità alla soluzione tampone. L'EDTA chela i cationi divalenti, come gli ioni magnesio, che altrimenti potrebbero promuovere interazioni non specifiche tra gli acidi nucleici o degradare gli acidi nucleici da parte delle nucleasi. Nella ricerca, il tampone TAE è comunemente usato nell'elettroforesi su gel di agarosio per separare i frammenti di DNA generati dalla digestione con enzimi di restrizione, dalla reazione a catena della polimerasi (PCR) o da altre tecniche di manipolazione degli acidi nucleici. La capacità tampone e la forza ionica del tampone consentono un'efficiente migrazione dei frammenti di acido nucleico attraverso la matrice del gel sotto l'influenza di un campo elettrico. Dopo l'elettroforesi, le bande di DNA o RNA possono essere visualizzate utilizzando coloranti fluorescenti, bromuro di etidio o altri coloranti per acidi nucleici. Inoltre, il tampone TAE è essenziale nelle tecniche di purificazione degli acidi nucleici, come l'estrazione da gel, dove viene utilizzato per solubilizzare i frammenti di DNA o RNA dai gel di agarosio per le successive applicazioni a valle. Gli sforzi di ricerca in corso si concentrano sull'ottimizzazione delle formulazioni del tampone TAE per applicazioni specifiche e sull'esplorazione della sua compatibilità con le tecniche di analisi degli acidi nucleici emergenti, come il sequenziamento di nuova generazione e la PCR digitale.