TRIM5α Plasmide Double Nickase (h): sc-409348-NIC
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- TRIM5α Plasmide Double Nickase (h) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il TRIM5α Double Nickase Plasmid (h) e il TRIM5α Double Nickase Plasmid (h2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira TRIM5. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
TRIM5α Plasmide Double Nickase (h) | sc-409348-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
TRIM5α Plasmide Double Nickase (h2) | sc-409348-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
TRIM5 (TRIM5α) è una ligasi E3 dell’ubiquitina con motivo tripartito inducibile dall’interferone che agisce come fattore di restrizione intrinseco contro l’infezione da retrovirus riconoscendo i capsidi in ingresso e innescando uno scapsidamento prematuro. Attraverso la sua attività di ubiquitinazione dipendente dal dominio RING e l’assemblaggio in reticoli di ordine superiore, TRIM5α attiva la segnalazione dell’immunità innata, incluse le vie di NF-κB e AP-1, e si integra con i meccanismi di controllo qualità proteico collegati al proteasoma e all’autofagia. TRIM5α partecipa anche al riconoscimento citosolico di pattern e contribuisce a modellare programmi trascrizionali infiammatori in seguito a una sfida virale. Le variazioni o l’alterata regolazione di TRIM5 sono state studiate in relazione alla suscettibilità alla replicazione retrovirale, alla responsività immunitaria antivirale e a una più ampia disregolazione della segnalazione immunitaria innata, rilevante per modelli di malattie infiammatorie.
TRIM5α Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus TRIM5 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di TRIM5. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di TRIM5. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con TRIM5 interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.