TRIM14 Plasmide di attivazione CRISPR (h2): sc-405847-ACT-2

Il TRIM14 umano (tripartite motif-containing 14) codifica un adattatore citosolico della famiglia TRIM coinvolto nella regolazione dell’immunità innata, in cui funge da impalcatura per complessi di segnalazione che modulano l’induzione dell’interferone di tipo I e programmi trascrizionali infiammatori a valle dei recettori di riconoscimento dei pattern. TRIM14 partecipa alle vie di difesa antivirale influenzando la propagazione del segnale dipendente dall’ubiquitina e la stabilità o l’attività di mediatori chiave come i componenti associati a cGAS–STING, MAVS e NF-κB, plasmando la produzione di citochine e l’espressione dei geni stimolati dall’interferone. Una segnalazione di TRIM14 deregolata è stata collegata ad alterazioni delle risposte ospite–patogeno e a fisiopatologie associate al sistema immunitario, incluse l’infiammazione cronica e contesti rilevanti per l’evasione immunitaria nei tumori. L’editing del gene TRIM14 e gli strumenti di genomica funzionale supportano studi meccanicistici della segnalazione dei PRR, del crosstalk con le vie dell’ubiquitina e delle reti trascrizionali guidate dall’interferone nelle cellule umane.

TRIM14 Il plasmide di attivazione CRISPR (h2) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di TRIM14 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

TRIM14 Il plasmide di attivazione CRISPR (h2) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus TRIM14 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione TRIM14, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di TRIM14. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus TRIM14 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da TRIM14 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via TRIM14 nelle cellule tumorali con espressione di TRIM14 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.