TRF2 Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-401289-ACT

Il gene umano **TERF2** codifica il fattore di legame alle ripetizioni telomeriche 2 (**TRF2**), un componente centrale del complesso shelterin che si lega al DNA telomerico a doppia elica per promuovere la formazione del **t-loop** e proteggere le estremità dei cromosomi dal riconoscimento come rotture a doppio filamento del DNA. TRF2 sopprime la segnalazione del danno al DNA dipendente da **ATM** e limita le fusioni cromosomiche estremità‑a‑estremità impedendo l’innesco inappropriato del **non-homologous end joining (NHEJ)** ai telomeri, sostenendo così la stabilità del genoma e una corretta progressione del ciclo cellulare. Attraverso i suoi ruoli nel capping telomerico, nella replicazione e nell’omeostasi della lunghezza dei telomeri, TERF2 contribuisce a coordinare la biologia dei telomeri con le vie di riparazione del DNA e dei checkpoint. La disregolazione di TRF2 è stata collegata a fenotipi di disfunzione telomerica ed è frequentemente studiata nel contesto dell’instabilità genomica associata ai processi di invecchiamento e alla biologia dei tumori.

TRF2 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di TERF2 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

TRF2 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus TERF2 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione TERF2, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di TRF2. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus TERF2 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da TRF2 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via TRF2 nelle cellule tumorali con espressione di TERF2 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.