TRC8 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m): sc-429220

Panoramica

Rnf139 codifica TRC8, una ligasi E3 dell’ubiquitina multipasso associata al reticolo endoplasmatico, contenente un dominio RING finger. TRC8 contribuisce al controllo ubiquitina-dipendente della stabilità proteica, collegando il controllo qualità della membrana del RE e la regolazione legata a steroli e lipidi a vie più ampie della proteostasi. Attraverso la modulazione dell’ubiquitinazione e del turnover di specifici substrati, TRC8 può influenzare il controllo della crescita cellulare, le risposte allo stress e le reti di segnalazione coordinate a livello del RE. La disregolazione della segnalazione ubiquitinica mediata da RNF139/TRC8 è stata studiata nel contesto di alterazioni della proliferazione e della stabilità del genoma, rendendola rilevante per studi meccanicistici di vie associate a patologie in modelli murini.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO TRC8 (m) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene Rnf139 in linee cellulari mouse. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del Rnf139 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto Rnf139 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina TRC8.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di Rnf139 per lo studio della segnalazione di TRC8, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni Rnf139 critici per la funzione di TRC8
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di Rnf139 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal TRC8 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) e dal TRC8 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus Rnf139. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal TRC8 Plasmide HDR (m) e il plasmide HDR TRC8 (m2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia Rnf139 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio Rnf139 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.