Partículas Lentivirales de Activación (h) TRB-3: sc-401746-LAC

TRIB3 codifica la pseudocinasa tribbles 3 (TRB-3), un adaptador similar a una cinasa pero catalíticamente inactivo, que modula la transducción de señales al servir de andamiaje para interacciones proteína–proteína. TRB-3 es conocido principalmente por regular negativamente el eje PI3K/AKT mediante su interacción con AKT, influyendo así en la señalización de la insulina, el metabolismo celular y los programas de adaptación al estrés. También integra respuestas al estrés del retículo endoplásmico y puede converger con las vías MAPK y TGF-β/SMAD para moldear la supervivencia celular, la diferenciación y la señalización inflamatoria. La expresión desregulada de TRIB3 se ha asociado con disfunción metabólica, procesos cardiovasculares y neurodegenerativos, y fenotipos relevantes para el cáncer, como la apoptosis alterada y la tolerancia al estrés terapéutico, lo que la convierte en un nodo útil para estudios mecanísticos centrados en vías.

Las partículas de activación lentiviral TRB-3 (h) responden a esta necesidad al empaquetar el sistema completo de activación transcripcional del mediador de activación sinérgica (SAM) en partículas lentivirales de alto título listas para la transducción, lo que permite una regulación al alza eficiente de TRIB3 en una gama más amplia de tipos de células humanas.

Las partículas de activación lentiviral TRB-3 (h) suministran todos los componentes funcionales del sistema mediador de activación sinérgica (SAM) a través de la transducción lentiviral. El sistema comprende tres preparaciones de partículas cotransducidas en las células diana: una que codifica dCas9 catalíticamente inactivo (mutaciones D10A y N863A) fusionado al dominio de transactivación VP64 con un gen de resistencia a la blasticidina; otra que codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1 con un gen de resistencia a la higromicina; y otra que codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 con un gen de resistencia a la puromicina. Tras la transducción lentiviral y la integración genómica de los casetes de expresión, los componentes del SAM se expresan de forma estable y se ensamblan en el locus diana dentro de la región promotora proximal, aguas arriba del sitio de inicio de la transcripción TRIB3, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma cooperativa para reclutar la maquinaria transcripcional endógena e impulsar la regulación al alza sostenida de la expresión endógena de TRB-3. El uso de dCas9 inactivo frente a nucleasas evita la introducción de roturas de ADN de doble cadena y preserva el locus genómico nativo TRIB3 y la arquitectura reguladora.

El formato lentiviral ofrece varias ventajas prácticas: la integración genómica estable permite la activación hereditaria a lo largo de las divisiones celulares; las preparaciones de partículas de alto título eliminan la necesidad de producir el virus internamente; y la compatibilidad con tipos de células primarias, no divisibles y resistentes a la transfección amplía la accesibilidad experimental. La transducción exitosa puede confirmarse y enriquecerse mediante selección con triple antibiótico utilizando puromicina, higromicina y blasticidina.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.