Trap1a Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m): sc-423500

Panoramica

Trap1a codifica un chaperone mitocondriale della famiglia HSP90 che sostiene la proteostasi stabilizzando e ripiegando le proteine client all’interno dell’organello. Trap1a influenza la respirazione mitocondriale, l’omeostasi delle specie reattive dell’ossigeno e la segnalazione adattativa allo stress, integrandosi con vie che regolano l’apoptosi e la riprogrammazione metabolica. Modulando l’efficienza della fosforilazione ossidativa e il controllo di qualità mitocondriale, Trap1a contribuisce alle risposte cellulari all’ipossia, alla limitazione di nutrienti e allo stress proteotossico. Un’attività di TRAP1 deregolata è stata associata ad alterazioni della bioenergetica e della tolleranza allo stress osservate in molteplici contesti rilevanti per la malattia, inclusi la neurodegenerazione e fenotipi metabolici associati ai tumori, rendendolo un bersaglio utile per studi meccanicistici in modelli murini.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO Trap1a (m) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene Trap1a in linee cellulari mouse. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del Trap1a insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto Trap1a a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina Trap1a.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di Trap1a per lo studio della segnalazione di Trap1a, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni Trap1a critici per la funzione di Trap1a
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di Trap1a per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal Trap1a CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) e dal Trap1a CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus Trap1a. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal Trap1a Plasmide HDR (m) e il plasmide HDR Trap1a (m2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia Trap1a per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio Trap1a definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.