TRAP100 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-417318

Panoramica

MED24 codifica TRAP100, una subunità essenziale del complesso Mediator che fa da ponte tra fattori di trascrizione specifici di sequenza e l’RNA polimerasi II, coordinando la comunicazione tra promotori ed enhancer e l’avvio della trascrizione. TRAP100 contribuisce a programmi di regolazione genica dipendenti dai segnali, inclusa la trascrizione guidata dai recettori nucleari e, più in generale, il controllo associato alla cromatina della progressione del ciclo cellulare, della differenziazione e delle risposte allo stress. L’alterazione delle subunità del Mediator, inclusa MED24, può perturbare reti trascrizionali collegate ad anomalie dello sviluppo e al riassetto oncogenico della trascrizione, rendendo MED24 un nodo utile per studiare il controllo dell’espressione genica a livello di via. La funzione di MED24/TRAP100 è quindi rilevante per indagini sulla disregolazione trascrizionale nella biologia del cancro e in altre malattie guidate da circuiti di regolazione genica alterati.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO TRAP100 (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene MED24 in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del MED24 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto MED24 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina TRAP100.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di MED24 per lo studio della segnalazione di TRAP100, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni MED24 critici per la funzione di TRAP100
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di MED24 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal TRAP100 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal TRAP100 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus MED24. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal TRAP100 Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR TRAP100 (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia MED24 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio MED24 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.