Transketolase Plasmide Double Nickase (m): sc-423410-NIC

Il gene murino **Tkt** codifica la transchetolasi, un enzima dipendente dal pirofosfato di tiamina che catalizza reazioni reversibili di trasferimento di unità a due atomi di carbonio nel ramo non ossidativo della via dei pentoso fosfati. Interconvertendo fosfati di zuccheri come xylulose-5-fosfato, ribose-5-fosfato e fructose-6-fosfato, la transchetolasi collega la biosintesi dei nucleotidi al flusso glicolitico e sostiene indirettamente l’equilibrio redox cellulare attraverso il coordinamento con l’attività del ramo ossidativo della PPP. La funzione di Tkt è quindi rilevante per il metabolismo proliferativo, per il mantenimento dei sistemi antiossidanti dipendenti da NADPH e per le esigenze anaboliche nelle cellule a rapida divisione. La disregolazione degli enzimi della PPP, inclusa la transchetolasi, è stata associata ad alterazioni dell’omeostasi metabolica e a fenotipi di stress ossidativo ampiamente studiati in contesti di ricerca sul metabolismo e sulla neurodegenerazione.

Transketolase Il plasmide Double Nickase (m) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus Tkt nelle linee cellulari mouse. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di Tkt. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di Tkt. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.

Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con Tkt interrotto.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.