Transketolase Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m): sc-423410

Panoramica

Il gene murino **Tkt** codifica la **transchetolasi**, un enzima dipendente dal **pirofosfato di tiamina** che catalizza reazioni reversibili di trasferimento di unità carboniose nel ramo non ossidativo della **via dei pentoso fosfati**. Interconvertendo i fosfati zuccherini, la transchetolasi sostiene la produzione di **ribosio-5-fosfato** per la biosintesi dei nucleotidi e contribuisce a bilanciare gli intermedi della glicolisi e della via dei pentoso fosfati, così da mantenere le esigenze cellulari di **redox** e **anabolismo**. L’attività di TKT è quindi collegata al metabolismo proliferativo, all’adattamento mitocondriale e allo **stress ossidativo** tramite processi dipendenti da **NADPH**, e a un più ampio controllo dei flussi dei carboidrati. Alterazioni nell’instradamento della via dei pentoso fosfati e nell’espressione della transchetolasi sono state associate a disregolazione metabolica e a fenotipi metabolici legati ai tumori, rendendo **Tkt** un bersaglio utile per studi meccanicistici del rimodellamento metabolico.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO Transketolase (m) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene Tkt in linee cellulari mouse. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del Tkt insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto Tkt a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina Transketolase.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di Tkt per lo studio della segnalazione di Transketolase, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni Tkt critici per la funzione di Transketolase
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di Tkt per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal Transketolase CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) e dal Transketolase CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus Tkt. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal Transketolase Plasmide HDR (m) e il plasmide HDR Transketolase (m2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia Tkt per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio Tkt definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.