Plasmide CRISPR/Cas9 KO Transketolase (m): sc-423410

Présentation

Le gène murin **Tkt** code la transkétolase, une enzyme dépendante du pyrophosphate de thiamine qui catalyse des réactions réversibles de transfert de carbone dans la branche non oxydative de la voie des pentoses phosphates. En interconvertissant les phosphates de sucres, la transkétolase soutient la production de ribose-5-phosphate pour la biosynthèse des nucléotides et contribue à équilibrer les intermédiaires de la glycolyse et de la voie des pentoses phosphates afin de répondre aux besoins cellulaires en pouvoir réducteur et en anabolisme. L’activité de TKT est donc liée au métabolisme prolifératif, à l’adaptation au stress mitochondrial et oxydatif via des processus dépendants du NADPH, ainsi qu’au contrôle plus global des flux glucidiques. Une redistribution des flux dans la voie des pentoses phosphates et des modifications de l’expression de la transkétolase ont été associées à une dérégulation métabolique et à des phénotypes métaboliques liés aux tumeurs, faisant de **Tkt** une cible utile pour des études mécanistiques du remodelage métabolique.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO Transketolase (m) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène Tkt dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du Tkt, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert Tkt à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine Transketolase.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en Tkt pour l'étude de la signalisation de Transketolase, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de Tkt essentiels à la fonction de Transketolase
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de Tkt pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le Transketolase plasmide CRISPR/Cas9 KO (m) et le Transketolase plasmide CRISPR/Cas9 KO (m2) ciblent des sites distincts au sein du locus Tkt. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le Transketolase plasmide HDR (m) et le Transketolase (m2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie Tkt pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles Tkt définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.