Non dati CRISPR: l'immagine illustra la qualità degli anticorpi per la visualizzazione dei risultati degli esperimenti CRISPR.
Non dati CRISPR: l'immagine illustra la qualità degli anticorpi per la visualizzazione dei risultati degli esperimenti CRISPR.
TRAF6 Plasmide Double Nickase (h): sc-400117-NIC
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- TRAF6 Plasmide Double Nickase (h) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il TRAF6 Double Nickase Plasmid (h) e il TRAF6 Double Nickase Plasmid (h2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira TRAF6. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: TRAF6 Antibody (D-10): sc-8409
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
TRAF6 Plasmide Double Nickase (h) | sc-400117-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
TRAF6 Plasmide Double Nickase (h2) | sc-400117-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
Il TRAF6 umano codifica una ligasi E3 dell’ubiquitina e una proteina adattatrice che collega la segnalazione della superfamiglia dei recettori del TNF e dei recettori Toll/IL-1 all’attivazione a valle delle vie NF-κB e MAPK. Attraverso la poliubiquitinazione a catena K63 di bersagli quali TAK1 e componenti del complesso IKK, TRAF6 contribuisce a coordinare programmi trascrizionali infiammatori, risposte immunitarie innate e segnalazione da stress. TRAF6 partecipa anche alla differenziazione degli osteoclasti tramite la segnalazione RANK–RANKL, collegandolo al rimodellamento osseo e al crosstalk immuno-scheletrico. Una segnalazione di TRAF6 deregolata è stata associata a infiammazione cronica, fenotipi autoimmuni e rimodellamento oncogenico delle vie di segnalazione in molteplici contesti tumorali.
TRAF6 Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus TRAF6 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di TRAF6. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di TRAF6. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con TRAF6 interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.