TRAF2 Plasmide Double Nickase (m): sc-423493-NIC

Mouse Traf2 codifica TRAF2, una proteina adattatrice e ligasi E3 dell’ubiquitina che collega la segnalazione della superfamiglia dei recettori del TNF all’attivazione a valle delle vie NF-κB e MAPK, modellando programmi trascrizionali che governano infiammazione, sopravvivenza cellulare e risposte allo stress. Attraverso interazioni con cIAP, RIPK1 e recettori a monte come TNFR e CD40, TRAF2 modula l’ubiquitinazione legata a K63 e l’assemblaggio dei complessi di segnale che determinano la produzione di citochine e le decisioni tra apoptosi e sopravvivenza. L’attività di Traf2 è inoltre collegata alla regolazione della via non canonica di NF-κB tramite il controllo della stabilità di NIK, influenzando la biologia delle cellule B e l’omeostasi immunitaria. Una segnalazione di TRAF2 deregolata è stata implicata in patologie immuno-mediate e in contesti di segnalazione oncogenica, rendendo Traf2 un nodo comune per studi meccanicistici sull’infiammazione indotta dai recettori e sulla segnalazione di sopravvivenza.

TRAF2 Il plasmide Double Nickase (m) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus Traf2 nelle linee cellulari mouse. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di Traf2. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di Traf2. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.

Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con Traf2 interrotto.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.