TRβ Plasmide Double Nickase (h): sc-401467-NIC
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- TRβ Plasmide Double Nickase (h) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il TRβ Double Nickase Plasmid (h) e il TRβ Double Nickase Plasmid (h2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira THRB. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: TRβ1 Antibody (J51): sc-737
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
TRβ Plasmide Double Nickase (h) | sc-401467-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
TRβ Plasmide Double Nickase (h2) | sc-401467-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
THRB codifica per il recettore beta degli ormoni tiroidei (TRβ), un recettore nucleare attivato dal ligando che lega la triiodotironina (T3) e regola la trascrizione tramite gli elementi di risposta agli ormoni tiroidei. TRβ coordina programmi che controllano il metabolismo cellulare, l’attività mitocondriale, l’omeostasi dei lipidi e del colesterolo, la termogenesi e la differenziazione, attraverso il crosstalk con l’eterodimerizzazione con RXR e il reclutamento di co-regolatori. L’attività di THRB è integrata con la segnalazione endocrina e con reti trascrizionali che modellano stati di sviluppo e metabolici specifici per tessuto. La disregolazione della segnalazione di THRB o della funzione del recettore è associata a un’alterata risposta agli ormoni tiroidei ed è stata studiata in contesti di squilibrio metabolico e di riprogrammazione trascrizionale oncogena.
TRβ Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus THRB nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di THRB. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di THRB. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con THRB interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.