TRα Particelle di Attivazione Lentivirale (h): sc-401475-LAC

THRA codifica il recettore alfa dell’ormone tiroideo (TRα), un recettore nucleare attivato dal ligando che lega la triiodotironina (T3) e regola la trascrizione tramite elementi di risposta all’ormone tiroideo. TRα coordina programmi genici di sviluppo e metabolismo modulando l’accessibilità della cromatina e il reclutamento di coregolatori, influenzando processi quali la differenziazione cellulare, la bioenergetica mitocondriale e il controllo del ciclo cellulare. In quanto nodo centrale della segnalazione degli ormoni tiroidei, THRA contribuisce alla responsività endocrina tessuto-specifica e al cross-talk con le vie MAPK/PI3K e dei recettori dei retinoidi. Una segnalazione TRα deregolata o una funzione recettoriale alterata è rilevante per fenotipi endocrini e metabolici e può influenzare i programmi di specificazione di linea studiati in modelli di ricerca sul neurosviluppo e in ambito cardiometabolico.

Le particelle di attivazione lentivirale TRα (h) rispondono a questa esigenza incapsulando il sistema completo di attivazione trascrizionale del mediatore di attivazione sinergica (SAM) in particelle lentivirali ad alto titolo pronte per la trasduzione, consentendo un'efficiente sovraregolazione di THRA in una gamma più ampia di tipi di cellule umane.

Le particelle di attivazione lentivirale TRα (h) veicolano tutti i componenti funzionali del sistema del mediatore di attivazione sinergica (SAM) tramite trasduzione lentivirale. Il sistema comprende tre preparati di particelle co-trasdotti nelle cellule bersaglio: uno che codifica per dCas9 cataliticamente inattivo (mutazioni D10A e N863A) fuso al dominio di transattivazione VP64 con un gene di resistenza alla blasticidina; una che codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1 con un gene di resistenza all'igromicina; e una che codifica un sgRNA di 20 nt specifico per il bersaglio fuso a due aptameri di RNA MS2 con un gene di resistenza alla puromicina. A seguito della trasduzione lentivirale e dell'integrazione genomica dei cassetti di espressione, i componenti del SAM vengono espressi in modo stabile e si assemblano nel locus bersaglio all'interno della regione promotrice prossimale a monte del sito di inizio della trascrizione THRA, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo cooperativo per reclutare il machinery trascrizionale endogeno e guidare una sovraregolazione sostenuta dell'espressione endogena di TRα. L'uso di dCas9 inattivo nei confronti delle nucleasi evita l'introduzione di rotture del DNA a doppio filamento e preserva il locus genomico nativo THRA e l'architettura regolatoria.

Il formato lentivirale offre diversi vantaggi pratici: l'integrazione genomica stabile supporta l'attivazione ereditaria attraverso le divisioni cellulari; le preparazioni di particelle ad alto titolo eliminano la necessità di una produzione virale interna; e la compatibilità con tipi di cellule primarie, non in divisione e resistenti alla trasfezione amplia l'accessibilità sperimentale. Il successo della trasduzione può essere confermato e potenziato attraverso una selezione antibiotica tripla utilizzando puromicina, igromicina e blasticidina.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.