Particules Lentivirales d'Activation (h) TPX2: sc-402581-LAC

TPX2 (targeting protein for Xklp2) code un facteur d’assemblage du fuseau associé aux microtubules, qui se concentre aux centrosomes et sur les microtubules du fuseau afin de favoriser l’activation de la kinase Aurora A et de stabiliser les fibres du kinétochore pendant la mitose. En coordonnant la nucléation des microtubules, l’organisation des pôles du fuseau et la ségrégation des chromosomes, TPX2 contribue à réguler la progression du cycle cellulaire lors de la transition G2/M et soutient la fidélité du contrôle du point de contrôle mitotique. Une expression dérégulée de TPX2 est fréquemment associée à des phénotypes prolifératifs et à une instabilité génomique, ce qui en fait un marqueur largement utilisé et un nœud mécanistique dans les études de l’aneuploïdie, des réponses au stress mitotique et de la biologie tumorale. La signalisation dépendante de TPX2 recoupe des voies qui contrôlent la dynamique des microtubules, la fonction des centrosomes et les réseaux de phosphorylation régulés par les kinases Aurora.

Les particules d'activation lentivirales TPX2 (h) répondent à ce besoin en encapsulant le système complet d'activation transcriptionnelle SAM (Synergistic Activation Mediator) dans des particules lentivirales à titre élevé prêtes à la transduction, permettant une régulation à la hausse efficace de TPX2 dans un plus large éventail de types de cellules humaines.

Les particules d'activation lentivirales TPX2 (h) délivrent tous les composants fonctionnels du système médiateur d'activation synergique (SAM) via la transduction lentivirale. Le système comprend trois préparations de particules co-transduites dans les cellules cibles : l'une codant pour une dCas9 catalytiquement inactive (mutations D10A et N863A) fusionnée au domaine de transactivation VP64 avec un gène de résistance à la blasticidine ; une codant pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1 avec un gène de résistance à l'hygromycine ; et une codant pour un ARNsg de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 avec un gène de résistance à la puromycine. Après transduction lentivirale et intégration génomique des cassettes d'expression, les composants du SAM sont exprimés de manière stable et s'assemblent au locus cible dans la région promotrice proximale en amont du site de départ de la transcription TPX2, où VP64, p65 et HSF1 agissent de manière coopérative pour recruter l'appareil transcriptionnel endogène et induire une régulation à la hausse soutenue de l'expression endogène de TPX2. L'utilisation de dCas9 inactif sur les nucléases évite l'introduction de cassures double brin de l'ADN et préserve le locus génomique natif TPX2 ainsi que l'architecture régulatrice.

Le format lentiviral offre plusieurs avantages pratiques : l'intégration génomique stable permet une activation héréditaire au fil des divisions cellulaires ; les préparations de particules à titre élevé éliminent le besoin d'une production virale en interne ; et la compatibilité avec les types de cellules primaires, non divisibles et résistantes à la transfection élargit l'accessibilité expérimentale. Le succès de la transduction peut être confirmé et renforcé par une triple sélection antibiotique utilisant la puromycine, l'hygromycine et la blasticidine.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.