TPX2 Particelle di Attivazione Lentivirale (h): sc-402581-LAC

TPX2 (targeting protein for Xklp2) codifica un fattore di assemblaggio del fuso associato ai microtubuli che si concentra nei centrosomi e nei microtubuli del fuso per promuovere l’attivazione della chinasi Aurora A e stabilizzare le fibre del cinetocore durante la mitosi. Coordinando la nucleazione dei microtubuli, l’organizzazione dei poli del fuso e la segregazione dei cromosomi, TPX2 contribuisce a regolare la progressione del ciclo cellulare attraverso la transizione G2/M e sostiene la fedeltà del controllo del checkpoint mitotico. Un’espressione deregolata di TPX2 è spesso associata a fenotipi proliferativi e instabilità genomica, rendendolo un marcatore ampiamente utilizzato e un nodo meccanicistico negli studi su aneuploidia, risposte allo stress mitotico e biologia tumorale. La segnalazione dipendente da TPX2 interseca vie che controllano la dinamica dei microtubuli, la funzione del centrosoma e le reti di fosforilazione regolate dalle chinasi Aurora.

Le particelle di attivazione lentivirale TPX2 (h) rispondono a questa esigenza incapsulando il sistema completo di attivazione trascrizionale del mediatore di attivazione sinergica (SAM) in particelle lentivirali ad alto titolo pronte per la trasduzione, consentendo un'efficiente sovraregolazione di TPX2 in una gamma più ampia di tipi di cellule umane.

Le particelle di attivazione lentivirale TPX2 (h) veicolano tutti i componenti funzionali del sistema del mediatore di attivazione sinergica (SAM) tramite trasduzione lentivirale. Il sistema comprende tre preparati di particelle co-trasdotti nelle cellule bersaglio: uno che codifica per dCas9 cataliticamente inattivo (mutazioni D10A e N863A) fuso al dominio di transattivazione VP64 con un gene di resistenza alla blasticidina; una che codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1 con un gene di resistenza all'igromicina; e una che codifica un sgRNA di 20 nt specifico per il bersaglio fuso a due aptameri di RNA MS2 con un gene di resistenza alla puromicina. A seguito della trasduzione lentivirale e dell'integrazione genomica dei cassetti di espressione, i componenti del SAM vengono espressi in modo stabile e si assemblano nel locus bersaglio all'interno della regione promotrice prossimale a monte del sito di inizio della trascrizione TPX2, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo cooperativo per reclutare il machinery trascrizionale endogeno e guidare una sovraregolazione sostenuta dell'espressione endogena di TPX2. L'uso di dCas9 inattivo nei confronti delle nucleasi evita l'introduzione di rotture del DNA a doppio filamento e preserva il locus genomico nativo TPX2 e l'architettura regolatoria.

Il formato lentivirale offre diversi vantaggi pratici: l'integrazione genomica stabile supporta l'attivazione ereditaria attraverso le divisioni cellulari; le preparazioni di particelle ad alto titolo eliminano la necessità di una produzione virale interna; e la compatibilità con tipi di cellule primarie, non in divisione e resistenti alla trasfezione amplia l'accessibilità sperimentale. Il successo della trasduzione può essere confermato e potenziato attraverso una selezione antibiotica tripla utilizzando puromicina, igromicina e blasticidina.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.