TPPP3 Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-405113-ACT

TPPP3 (tubulin polymerization promoting protein family member 3) è una proteina associata ai microtubuli coinvolta nell’organizzazione e nella dinamica del citoscheletro, influenzando processi quali la forma cellulare, il trasporto intracellulare e la progressione del ciclo cellulare. Modulando la polimerizzazione della tubulina e la stabilità dei microtubuli, TPPP3 può incidere su vie legate alla differenziazione epiteliale, alla motilità e alle risposte allo stress. Un’alterazione dell’espressione di TPPP3 è stata riportata in molteplici contesti patologici, inclusi i carcinomi, in cui i cambiamenti nella regolazione del citoscheletro correlano con fenotipi di invasione e proliferazione. Queste proprietà rendono TPPP3 un bersaglio utile per studi meccanicistici della segnalazione dipendente dai microtubuli e della plasticità fenotipica nelle cellule umane.

TPPP3 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di TPPP3 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

TPPP3 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus TPPP3 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione TPPP3, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di TPPP3. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus TPPP3 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da TPPP3 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via TPPP3 nelle cellule tumorali con espressione di TPPP3 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.