TPO CRISPR Activationプラスミド (h): sc-417243-ACT

ヒトTHPO遺伝子はトロンボポエチン（TPO）をコードしており、TPOは分泌性サイトカインとして巨核球の増殖および血小板産生を主に制御する因子である。TPOは主としてMPLを介してシグナルを伝達し、JAK2/STAT5、PI3K/AKT、MAPK経路を活性化することで、造血幹細胞・前駆細胞の維持や系譜コミットメントを支持する。THPO–MPLシグナル伝達の異常は血小板恒常性の変化と関連し、骨髄増殖性腫瘍をはじめとする造血障害の病態形成にも寄与することが示されている。THPOは肝臓優位に産生され、血小板量によるフィードバック制御を受ける内分泌因子であるため、サイトカイン駆動性の転写プログラムや造血ニッチにおけるシグナル伝達を研究するうえで、解析しやすい標的（ノード）となる。

TPO CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性THPOの発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

TPO CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における THPO 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はTHPO転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性TPOの発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のTHPO遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるTPO依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびTHPO発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるTPO経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。