TPD52 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m): sc-423477

Panoramica

Tpd52 codifica la tumor protein D52 (TPD52), un regolatore conservato del traffico di membrana e della dinamica della via secretoria, che influenza il trasporto vescicolare, l’esocitosi e la distribuzione delle proteine sulla superficie cellulare. Nelle cellule di topo, l’attività di TPD52 è stata collegata a processi che supportano la crescita e il rimodellamento cellulare, inclusi il coordinamento dei compartimenti di membrana intracellulari e gli output di segnalazione associati alla funzione delle cellule epiteliali e immunitarie. Un’espressione deregolata di TPD52 è stata riportata in molteplici contesti legati al cancro, in cui alterazioni del traffico e della secrezione possono influenzare proliferazione, migrazione e adattamento metabolico. Di conseguenza, Tpd52 viene comunemente studiato in modelli di biologia tumorale e di plasticità dello stato cellulare per definire come il trasporto di membrana si interfacci con programmi di segnalazione oncogenici.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO TPD52 (m) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene Tpd52 in linee cellulari mouse. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del Tpd52 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto Tpd52 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina TPD52.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di Tpd52 per lo studio della segnalazione di TPD52, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni Tpd52 critici per la funzione di TPD52
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di Tpd52 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal TPD52 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) e dal TPD52 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus Tpd52. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal TPD52 Plasmide HDR (m) e il plasmide HDR TPD52 (m2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia Tpd52 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio Tpd52 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.