TPCN1 Lentiviral Activation Particles (h): sc-404943-LAC

TPCN1 (Two-Pore-Segment-Kanal 1; TPC1) kodiert einen endolysosomalen Kationenkanal, der eine NAADP-abhängige Ca²⁺-Freisetzung aus sauren Organellen vermittelt und lokale Calcium-Mikrodomänen koordiniert, die den vesikulären Transport, die Endosom–Lysosom-Dynamik und die Membranerregbarkeit prägen. Durch die Kopplung von Ionenfluss an das Membranpotenzial der Organellen sowie an pH-abhängige Signalgebung beeinflusst TPCN1 Prozesse wie Autophagie, die Sortierung endozytierter Fracht und das Recycling von Rezeptoren. Die TPCN1-Aktivität greift in calciumabhängige Signalnetzwerke und nährstoffsensitive Signalwege ein, die zelluläre Stressantworten und den Stoffwechsel regulieren. Eine fehlregulierte endolysosomale Calciumhomöostase und damit verbundene Transportprogramme, die mit TPCN1 verknüpft sind, werden u. a. im Kontext von Neurodegeneration, Pigment- und Stoffwechselphänotypen sowie krebsassoziierter Invasion und Migration untersucht.

TPCN1 Lentivirale Aktivierungspartikel (h) erfüllen diesen Bedarf, indem sie das vollständige Transkriptionsaktivierungssystem des Synergistic Activation Mediator (SAM) in transduktionsbereite, hoch-titrige lentivirale Partikel verpacken und so eine effiziente TPCN1-Hochregulation über ein breiteres Spektrum menschlicher Zelltypen ermöglichen.

TPCN1 Lentivirale Aktivierungspartikel (h) liefern alle funktionellen Komponenten des Synergistic Activation Mediator (SAM)-Systems über lentivirale Transduktion. Das System umfasst drei Partikelpräparate, die gemeinsam in Zielzellen transduziert werden: eines, das für katalytisch inaktives dCas9 (Mutationen D10A und N863A) kodiert, das mit der VP64-Transaktivierungsdomäne und einem Blasticidin-Resistenzgen fusioniert ist; eines, das für das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein mit einem Hygromycin-Resistenzgen kodiert; und eines, das für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA kodiert, die an zwei MS2-RNA-Aptamere mit einem Puromycin-Resistenzgen fusioniert ist. Nach der lentiviralen Transduktion und der genomischen Integration der Expressionskassetten werden die SAM-Komponenten stabil exprimiert und lagern sich am Zielort innerhalb der proximalen Promotorregion stromaufwärts der TPCN1-Transkriptionsstartstelle an, wo VP64, p65 und HSF1 kooperativ wirken, um endogene Transkriptionsmaschinerie zu rekrutieren und eine anhaltende Hochregulation der endogenen TPCN1-Expression zu bewirken. Die Verwendung von nuklease-inaktivem dCas9 verhindert die Einführung von Doppelstrangbrüchen in der DNA und bewahrt den nativen TPCN1-Genomlokus sowie die regulatorische Architektur.

Das lentivirale Format bietet mehrere praktische Vorteile: Die stabile genomische Integration unterstützt eine vererbbare Aktivierung über Zellteilungen hinweg; Partikelpräparate mit hohem Titer machen eine eigene Virusproduktion überflüssig; und die Kompatibilität mit primären, sich nicht teilenden und transfektionsresistenten Zelltypen erweitert die experimentellen Möglichkeiten. Eine erfolgreiche Transduktion kann durch eine dreifache Antibiotika-Selektion mit Puromycin, Hygromycin und Blasticidin bestätigt und verstärkt werden.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.