TorsinB Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-407379

Panoramica

TOR1B codifica TorsinB, un’ATPasi AAA+ localizzata nel reticolo endoplasmatico e nello spazio perinucleare, che contribuisce al controllo qualità delle proteine e al mantenimento dell’architettura dell’involucro nucleare. TorsinB partecipa a processi legati all’omeostasi del RE, al rimodellamento delle membrane e alla regolazione della biogenesi del complesso del poro nucleare, spesso con sovrapposizione funzionale con altri membri della famiglia delle torsine. L’alterazione delle vie mediate dalle torsine può perturbare l’accoppiamento nucleo-citoscheletrico e le risposte cellulari allo stress, rendendo TOR1B rilevante per studi sulla funzione neuronale e sulla biologia dei disturbi del movimento. In quanto gene umano con ruoli all’interfaccia tra RE e involucro nucleare, TOR1B viene spesso studiato in modelli che esaminano proteostasi, meccanotrasduzione e integrità degli organelli.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO TorsinB (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene TOR1B in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del TOR1B insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto TOR1B a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina TorsinB.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di TOR1B per lo studio della segnalazione di TorsinB, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni TOR1B critici per la funzione di TorsinB
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di TOR1B per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal TorsinB CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal TorsinB CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus TOR1B. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal TorsinB Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR TorsinB (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia TOR1B per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio TOR1B definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.