TOPORS Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-406762

Panoramica

TOPORS (proteina legante la topoisomerasi I, ricca in arginina/serina) codifica una proteina nucleare che funziona come ligasi E3 dell’ubiquitina di tipo RING e come ligasi E3 di SUMO1, integrando ubiquitinazione e sumoilazione per controllare la stabilità proteica e la segnalazione. Si localizza nei corpi nucleari della leucemia promielocitica (PML) e contribuisce all’integrità del genoma attraverso la regolazione della risposta al danno al DNA e di processi associati alla trascrizione. TOPORS è stata collegata al controllo della segnalazione di p53 e della proteostasi, mettendola in relazione con le risposte cellulari allo stress e con la regolazione del ciclo cellulare. Varianti genetiche e alterazioni dell’espressione di TOPORS sono state associate a fenotipi di degenerazione retinica e, più in generale, a una maggiore suscettibilità a una segnalazione nucleare deregolata in contesti rilevanti per la malattia.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO TOPORS (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene TOPORS in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del TOPORS insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto TOPORS a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina TOPORS.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di TOPORS per lo studio della segnalazione di TOPORS, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni TOPORS critici per la funzione di TOPORS
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di TOPORS per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal TOPORS CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal TOPORS CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus TOPORS. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal TOPORS Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR TOPORS (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia TOPORS per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio TOPORS definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.