TOPORS Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h): sc-406762

Descripción general

TOPORS (proteína de unión a topoisomerasa I rica en arginina/serina) codifica una proteína nuclear que actúa como ligasa E3 de ubiquitina tipo RING y como ligasa E3 de SUMO1, integrando la ubiquitinación y la sumoilación para controlar la estabilidad proteica y la señalización. Se localiza en los cuerpos nucleares de la leucemia promielocítica (PML) y contribuye a la integridad del genoma mediante la regulación de la respuesta al daño del ADN y de procesos asociados a la transcripción. TOPORS se ha vinculado con el control de la señalización de p53 y de la proteostasis, conectándola con las respuestas al estrés celular y la regulación del ciclo celular. Variaciones genéticas y alteraciones en la expresión de TOPORS se han asociado con fenotipos de degeneración retiniana y con una susceptibilidad más amplia a una señalización nuclear desregulada en contextos relevantes para enfermedades.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO TOPORS (h) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen TOPORS en líneas celulares human. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del TOPORS junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de TOPORS tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína TOPORS.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en TOPORS para la investigación de la señalización de TOPORS, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de TOPORS críticos para la función de TOPORS
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de TOPORS para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido TOPORS CRISPR/Cas9 KO (h) y el plásmido TOPORS CRISPR/Cas9 KO (h2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus TOPORS. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR TOPORS (h) y el plásmido HDR TOPORS (h2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología TOPORS para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana TOPORS definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.