Tom70 Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-402022-ACT

TOMM70 codifica Tom70, una subunità recettoriale della traslocasi della membrana mitocondriale esterna che riconosce le preproteine legate a chaperoni e ne supporta l’importazione nei mitocondri. Coordinando la consegna di proteine carrier idrofobiche e di altre proteine mitocondriali codificate dal nucleo, Tom70 contribuisce a mantenere la proteostasi mitocondriale, la biogenesi della catena respiratoria e l’omeostasi metabolica. L’alterazione o la disregolazione dei processi di importazione associati a TOMM70 è collegata a risposte di stress mitocondriale che possono influenzare la segnalazione dell’immunità innata, l’apoptosi e l’adattamento cellulare alle richieste energetiche. La capacità di importazione mitocondriale alterata è stata studiata nel contesto della neurodegenerazione, della disfunzione cardiometabolica e del rimodellamento metabolico associato al cancro, rendendo TOMM70 un nodo utile per indagare i meccanismi patologici guidati dai mitocondri.

Tom70 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di TOMM70 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

Tom70 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus TOMM70 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione TOMM70, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di Tom70. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus TOMM70 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da Tom70 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via Tom70 nelle cellule tumorali con espressione di TOMM70 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.