Non dati CRISPR: l'immagine illustra la qualità degli anticorpi per la visualizzazione dei risultati degli esperimenti CRISPR.
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TOM40 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-400967
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- TOM40 Il plasmide CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (h) è un pool di plasmidi, ciascuno dei quali codifica la nucleasi Cas9 e un RNA guida (gRNA) specifico per il bersaglio di 20 nt, progettato per la massima efficienza di knockout utilizzando sequenze derivate dalla libreria GeCKO v2
- Le sequenze gRNA indirizzano Cas9 a indurre rotture a doppio filamento (DSB) sito-specifiche nel locus genomico TOM40, con conseguente knockout genico tramite giunzione non omologa (NHEJ)
- I geni di resistenza alla puromicina e RFP sono fiancheggiati da siti LoxP, consentendo la rimozione dei marcatori di selezione tramite la ricombinasi Cre (Cre Vector: sc-418923) dopo aver stabilito linee cellulari knockout stabili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: Tom40 Antibody (D-2): sc-365467
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
TOM40 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h) | sc-400967 | 20 µg | $397.00 |
Panoramica
TOMM40 codifica TOM40, la subunità a β-barile che forma il poro della traslocasi della membrana mitocondriale esterna (complesso TOM), che media il riconoscimento e l’importazione delle proteine mitocondriali codificate dal nucleo. Controllando la traslocazione dei precursori nei mitocondri, TOM40 supporta la fosforilazione ossidativa, la proteostasi mitocondriale e vie di controllo qualità sensibili allo stress, inclusa la mitofagia. Alterazioni della funzione o dell’espressione di TOMM40 possono perturbare la bioenergetica mitocondriale e favorire l’accumulo di proteine localizzate in modo aberrante, collegando i difetti di importazione mitocondriale a meccanismi di malattie neurodegenerative e metaboliche. La variazione genetica nel locus TOMM40 è stata studiata in relazione a fenotipi associati all’invecchiamento e al rischio di patologie neurologiche, motivando indagini meccanicistiche in modelli cellulari pertinenti.
Il plasmide CRISPR/Cas9 KO TOM40 (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene TOMM40 in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del TOMM40 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.
Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto TOMM40 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina TOM40.
Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di TOMM40 per lo studio della segnalazione di TOM40, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.
Caratteristiche principali
- sgRNA mirati agli esoni TOMM40 critici per la funzione di TOM40
Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di TOMM40 per migliorare l'efficienza del knockout
Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione
Varianti di progettazione
CRISPR +/- HDR
- Gli gRNA codificati dal TOM40 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal TOM40 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus TOMM40. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
I costrutti donatori HDR codificati dal TOM40 Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR TOM40 (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia TOMM40 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio TOMM40 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.