Tom20 Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-400041-ACT

Il gene umano **TOMM20** codifica **Tom20**, un recettore principale del complesso **TOM** (translocasi della membrana mitocondriale esterna) che riconosce le presequenze di targeting N‑terminali e avvia l’importazione nei mitocondri delle proteine codificate dal nucleo. Controllando il traffico proteico mitocondriale, Tom20 sostiene la fosforilazione ossidativa, la dinamica mitocondriale e la proteostasi, e influenza le risposte cellulari allo stress energetico. Alterazioni dell’espressione o della funzione di TOMM20 sono state associate a disfunzione mitocondriale e a perturbazioni dell’apoptosi e della segnalazione dell’immunità innata, rendendolo rilevante per studi sul metabolismo del cancro e sui meccanismi delle malattie neurodegenerative. TOMM20 è quindi ampiamente utilizzato come marcatore mitocondriale e come nodo funzionale che collega la biogenesi dell’organello alle vie di sopravvivenza cellulare.

Tom20 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di TOMM20 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

Tom20 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus TOMM20 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione TOMM20, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di Tom20. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus TOMM20 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da Tom20 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via Tom20 nelle cellule tumorali con espressione di TOMM20 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.