TNF-R2 Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-400709-ACT

TNFRSF1B codifica il recettore 2 del fattore di necrosi tumorale (TNF-R2), un membro della famiglia dei recettori del TNF espresso preferenzialmente nelle linee cellulari immunitarie ed endoteliali e attivato dal TNF legato alla membrana. La segnalazione di TNF-R2 recluta adattatori TRAF per modulare le vie NF-κB canonica e non canonica, nonché le vie MAPK e PI3K/AKT, plasmando programmi di sopravvivenza cellulare, proliferazione e produzione di citochine infiammatorie. Oltre ai ruoli immunoregolatori, TNF-R2 influenza il rimodellamento tissutale e le risposte angiogeniche tramite crosstalk con reti apoptotiche e di risposta allo stress. Un’attività deregolata di TNFRSF1B è stata associata a condizioni infiammatorie e autoimmuni, a patologie vascolari e alla biologia del microambiente tumorale–immunitario, rendendolo rilevante per studi meccanicistici dell’omeostasi immunitaria e dell’infiammazione cronica.

TNF-R2 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di TNFRSF1B senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

TNF-R2 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus TNFRSF1B nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione TNFRSF1B, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di TNF-R2. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus TNFRSF1B nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da TNF-R2 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via TNF-R2 nelle cellule tumorali con espressione di TNFRSF1B silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.