TNFα-IP 2 Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-401685-ACT

TNFAIP2 (proteina 2 indotta da TNFα; TNFα-IP 2) è un gene responsivo all’infiammazione, indotto da TNFα e da altri stimoli capaci di attivare NF-κB, che collega la segnalazione citochinica ai programmi di rimodellamento cellulare. La proteina è stata implicata nella regolazione della dinamica del citoscheletro di actina, del traffico di membrana e della motilità cellulare, supportando processi quali adesione e migrazione in contesti immunitari e stromali. L’espressione di TNFAIP2 correla con stati infiammatori attivati ed è spesso studiata in vie che connettono la segnalazione dell’immunità innata, l’attivazione vascolare/endoteliale e il rimodellamento tissutale. Una deregolazione di TNFAIP2 è stata associata a infiammazione patologica e a fenotipi legati al cancro, stimolando studi meccanicistici su come gli output trascrizionali dipendenti da NF-κB plasmino il comportamento cellulare.

TNFα-IP 2 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di TNFAIP2 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

TNFα-IP 2 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus TNFAIP2 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione TNFAIP2, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di TNFα-IP 2. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus TNFAIP2 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da TNFα-IP 2 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via TNFα-IP 2 nelle cellule tumorali con espressione di TNFAIP2 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.