Plasmide CRISPR d'Activation (h) TNFα-IP 2: sc-401685-ACT

TNFAIP2 (protéine 2 induite par le TNFα ; TNFα‑IP2) est un gène sensible à l’inflammation, induit par le TNFα et d’autres stimuli activateurs de NF‑κB, reliant la signalisation des cytokines aux programmes de remodelage cellulaire. La protéine a été impliquée dans la régulation de la dynamique du cytosquelette d’actine, du trafic membranaire et de la motilité cellulaire, soutenant des processus tels que l’adhésion et la migration dans des contextes immunitaires et stromaux. L’expression de TNFAIP2 est corrélée aux états inflammatoires activés et est fréquemment étudiée dans des voies reliant la signalisation de l’immunité innée, l’activation vasculaire/endothéliale et le remodelage tissulaire. Une dérégulation de TNFAIP2 a été associée à l’inflammation pathologique et à des phénotypes liés au cancer, ce qui motive des études mécanistiques visant à comprendre comment les sorties transcriptionnelles dépendantes de NF‑κB façonnent le comportement cellulaire.

TNFα-IP 2 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de TNFAIP2 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

TNFα-IP 2 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus TNFAIP2 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription TNFAIP2, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de TNFα-IP 2. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus TNFAIP2 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de TNFα-IP 2 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie TNFα-IP 2 dans les cellules tumorales présentant une expression de TNFAIP2 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.