TNF alpha Plasmide Double Nickase (m): sc-423433-NIC

Il gene murino *Tnf* codifica il fattore di necrosi tumorale alfa (TNFα), una citochina pro-infiammatoria pleiotropica prodotta principalmente da macrofagi attivati, linfociti T e altre popolazioni dell’immunità innata. Il TNFα segnala attraverso TNFR1 e TNFR2 per regolare le cascate di NF-κB e MAPK, controllando così l’induzione di citochine, il reclutamento dei leucociti, la sopravvivenza cellulare e le vie di morte cellulare programmata, incluse apoptosi e necroptosi. In quanto nodo centrale della segnalazione infiammatoria, il TNFα modella il rimodellamento tissutale, l’attivazione vascolare e l’omeostasi immunitaria ed è ampiamente studiato in contesti di autoimmunità, infezione, infiammazione metabolica e neuroinfiammazione. Un’attività deregolata di *Tnf* è associata a fenotipi infiammatori cronici e a un’alterata comunicazione tra immunità innata e adattativa nei modelli murini di malattia.

TNF alpha Il plasmide Double Nickase (m) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus Tnf nelle linee cellulari mouse. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di Tnf. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di Tnf. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.

Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con Tnf interrotto.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.