TMPRSS11A Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-415530-ACT

TMPRSS11A codifica una serin proteasi transmembrana di tipo II che si localizza sulla superficie cellulare e partecipa alla proteolisi pericellulare nelle interfacce epiteliali. Scindendo substrati extracellulari e associati alla membrana, TMPRSS11A può influenzare i programmi di differenziazione epiteliale, il mantenimento della barriera e le reti di segnalazione attivate da proteasi che modellano il rimodellamento tissutale e le risposte infiammatorie. La sua attività si intreccia con cascate più ampie di serin proteasi e può modulare la disponibilità di peptidi bioattivi e di segnali correlati ai fattori di crescita nel microambiente locale. Un’espressione deregolata delle serin proteasi ancorate alla membrana, inclusa TMPRSS11A, è stata associata ad alterazioni della biologia delle vie aeree e delle mucose ed è stata esplorata nel contesto della fisiopatologia epiteliale e del rimodellamento proteasico correlato al cancro.

TMPRSS11A Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di TMPRSS11A senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

TMPRSS11A Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus TMPRSS11A nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione TMPRSS11A, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di TMPRSS11A. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus TMPRSS11A nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da TMPRSS11A nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via TMPRSS11A nelle cellule tumorali con espressione di TMPRSS11A silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.