TMEM98 Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-409870-ACT

TMEM98 codifica una proteina transmembrana multipasso arricchita nei tessuti oculari e neurali, dove è implicata nella regolazione della segnalazione associata alla membrana e dell’omeostasi cellulare. Nell’uomo, TMEM98 è stata collegata a processi che influenzano l’organizzazione della matrice extracellulare e il patterning dello sviluppo, in linea con ruoli nella morfogenesi dei tessuti e nella comunicazione cellula–cellula. Studi genetici associano le varianti di TMEM98 a fenotipi oculari ereditari, incluse anomalie del nervo ottico e del segmento anteriore, a supporto della sua rilevanza per i meccanismi che modellano la struttura della retina e del nervo ottico. Queste caratteristiche rendono TMEM98 un bersaglio utile per studiare come le proteine di membrana modulino i programmi trascrizionali e i segnali del microambiente nello sviluppo e nel rimodellamento associato alle malattie.

TMEM98 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di TMEM98 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

TMEM98 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus TMEM98 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione TMEM98, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di TMEM98. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus TMEM98 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da TMEM98 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via TMEM98 nelle cellule tumorali con espressione di TMEM98 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.