TMEM65 Plasmide Double Nickase (h): sc-406584-NIC
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- TMEM65 Plasmide Double Nickase (h) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il TMEM65 Double Nickase Plasmid (h) e il TMEM65 Double Nickase Plasmid (h2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira TMEM65. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
TMEM65 Plasmide Double Nickase (h) | sc-406584-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
TMEM65 Plasmide Double Nickase (h2) | sc-406584-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
TMEM65 codifica una proteina della membrana interna mitocondriale implicata nel mantenimento dell’architettura mitocondriale e nel supporto della fosforilazione ossidativa, con effetti a valle sulla produzione di ATP e sull’equilibrio redox cellulare. Influenzando l’organizzazione delle proteine mitocondriali e la funzione della catena respiratoria, TMEM65 contribuisce a processi quali la regolazione del potenziale di membrana e l’omeostasi mitocondriale. Un’alterata attività di TMEM65 è stata associata a disfunzioni bioenergetiche e a fenotipi coerenti con meccanismi di malattia mitocondriale, rendendola rilevante per studi sulle risposte allo stress neuromuscolare e cardiometabolico. La sua localizzazione mitocondriale la rende inoltre un nodo utile per indagare i collegamenti di segnalazione tra disfunzione mitocondriale, proteostasi e vie di adattamento cellulare.
TMEM65 Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus TMEM65 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di TMEM65. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di TMEM65. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con TMEM65 interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.