TMEM53 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-413194

Panoramica

TMEM53 (proteina transmembrana 53) codifica una piccola proteina associata alla membrana, implicata nella regolazione della segnalazione legata all’involucro nucleare e dell’omeostasi cellulare. Studi recenti collegano TMEM53 a vie che controllano la segnalazione BMP/SMAD e il controllo trascrizionale, suggerendo un ruolo nel coordinare la trasduzione del segnale intracellulare con le risposte nucleari. Alterazioni della funzione di TMEM53 sono state associate a perturbazioni dello sviluppo scheletrico e cranio-facciale e a fenotipi ossei correlati, rendendola di interesse per studi meccanicistici sulla differenziazione osteogenica e sulla biologia dello sviluppo. La sua espressione e la presunta localizzazione di membrana supportano inoltre indagini sul crosstalk tra organelli, sul traffico proteico e sulla modulazione delle vie di segnalazione dipendente dal contesto.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO TMEM53 (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene TMEM53 in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del TMEM53 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto TMEM53 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina TMEM53.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di TMEM53 per lo studio della segnalazione di TMEM53, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni TMEM53 critici per la funzione di TMEM53
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di TMEM53 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal TMEM53 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal TMEM53 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus TMEM53. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal TMEM53 Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR TMEM53 (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia TMEM53 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio TMEM53 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.