TMEM43 Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-402764-ACT

TMEM43 (proteina transmembrana 43), nota anche come LUMA, è una proteina della membrana nucleare interna che si associa alla lamina nucleare e contribuisce all’organizzazione dell’involucro nucleare, alla meccanotrasduzione e al mantenimento dell’architettura del nucleo. Interagendo con le lamine e con altri componenti dell’involucro, TMEM43 influenza il posizionamento della cromatina e programmi di regolazione genica legati alla differenziazione cellulare e alle risposte allo stress. Alterazioni della funzione di TMEM43 sono state collegate a fenotipi cardiaci e neuromuscolari, inclusa la cardiomiopatia aritmogena, evidenziandone la rilevanza nello studio dei meccanismi di malattia associati all’involucro nucleare. Nei modelli cellulari umani, la perturbazione di TMEM43 è spesso utilizzata per esplorare i legami tra struttura nucleare, controllo trascrizionale e stabilità dello stato cellulare.

TMEM43 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di TMEM43 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

TMEM43 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus TMEM43 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione TMEM43, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di TMEM43. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus TMEM43 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da TMEM43 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via TMEM43 nelle cellule tumorali con espressione di TMEM43 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.