TMEM182 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m): sc-436273

Panoramica

Tmem182 codifica TMEM182, una proteina transmembrana multi-pass prevista, con espressione arricchita nel muscolo scheletrico e collegata ai programmi di differenziamento miogenico. Sebbene la sua funzione molecolare non sia ancora completamente definita, TMEM182 è stata associata a processi di segnalazione associati alla membrana e di rimodellamento cellulare che accompagnano lo sviluppo e la rigenerazione muscolare. Studi trascrittomici hanno riportato una regolazione di Tmem182 in contesti che coinvolgono adattamento metabolico e segnali infiammatori, suggerendo una rilevanza per vie che modellano l’omeostasi muscolare e le risposte allo stress. Un’espressione deregolata è stata osservata in fenotipi legati al muscolo e in modelli sperimentali di rimodellamento tissutale, supportandone l’uso come bersaglio per studi meccanicistici in biologia muscoloscheletrica.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO TMEM182 (m) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene Tmem182 in linee cellulari mouse. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del Tmem182 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto Tmem182 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina TMEM182.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di Tmem182 per lo studio della segnalazione di TMEM182, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni Tmem182 critici per la funzione di TMEM182
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di Tmem182 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal TMEM182 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) e dal TMEM182 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus Tmem182. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal TMEM182 Plasmide HDR (m) e il plasmide HDR TMEM182 (m2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia Tmem182 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio Tmem182 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.