TMEM175 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-413613

Panoramica

TMEM175 codifica un canale transmembrana lisosomiale e del tardo endosoma che contribuisce all’omeostasi ionica degli organelli e alla stabilità del pH del lume. Regolando la funzione dei lisosomi, TMEM175 influenza il flusso autofagico, il traffico endolisosomiale e le vie di proteostasi che governano la degradazione delle proteine e degli organelli danneggiati. Alterazioni dell’attività di TMEM175 sono state associate a una compromissione della clearance dipendente dai lisosomi e delle risposte cellulari allo stress, collegando questo gene a meccanismi rilevanti per la neurodegenerazione. TMEM175 viene quindi studiato nel contesto della biologia dei lisosomi, del crosstalk con il controllo di qualità mitocondriale e delle vie che modulano l’adattamento infiammatorio e metabolico.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO TMEM175 (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene TMEM175 in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del TMEM175 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto TMEM175 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina TMEM175.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di TMEM175 per lo studio della segnalazione di TMEM175, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni TMEM175 critici per la funzione di TMEM175
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di TMEM175 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal TMEM175 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal TMEM175 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus TMEM175. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal TMEM175 Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR TMEM175 (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia TMEM175 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio TMEM175 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.