TLR9 Plasmide Double Nickase (h): sc-400600-NIC
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- TLR9 Plasmide Double Nickase (h) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il TLR9 Double Nickase Plasmid (h) e il TLR9 Double Nickase Plasmid (h2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira TLR9. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: TLR9 Antibody (5G5): sc-47723
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
TLR9 Plasmide Double Nickase (h) | sc-400600-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
TLR9 Plasmide Double Nickase (h2) | sc-400600-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
Il recettore Toll-like 9 (TLR9) è un recettore endosomiale di riconoscimento di pattern (pattern-recognition receptor) che rileva motivi CpG non metilati nel DNA di origine microbica e nel DNA endogeno, avviando il rilevamento da parte dell’immunità innata. In seguito al legame con il ligando e alla processazione proteolitica endosomiale, TLR9 segnala principalmente tramite l’adattatore MyD88 per attivare i programmi trascrizionali di NF-κB e IRF, inducendo la produzione di citochine infiammatorie e risposte di interferone di tipo I. Questa via contribuisce all’immunità antivirale e antibatterica e modula la funzione delle cellule presentanti l’antigene, inclusa l’attivazione dei linfociti B. Una segnalazione di TLR9 deregolata è stata collegata a fenotipi autoinfiammatori e autoimmuni ed è stata studiata in contesti quali il lupus eritematoso sistemico, la psoriasi e l’infiammazione associata ai tumori.
TLR9 Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus TLR9 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di TLR9. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di TLR9. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con TLR9 interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.