TLR7 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m): sc-431302

Panoramica

Tlr7 codifica il recettore Toll-like 7 (TLR7), un recettore endosomiale di riconoscimento di pattern che rileva RNA a singolo filamento e ligandi sintetici imidazoquinolinici, avviando la segnalazione dell’immunità innata. In seguito all’attivazione, TLR7 si associa a MYD88 e attiva la via di segnalazione IRAK–TRAF6, promuovendo la trascrizione, mediata da NF-κB e dipendente da IRF7, di interferoni di tipo I e citochine proinfiammatorie, modulando le difese antivirali e le risposte delle cellule B. Nel topo, l’attività di TLR7 influenza l’attivazione delle cellule dendritiche, la dinamica dei centri germinali e i microambienti citochinici che coordinano l’immunità adattativa. Una segnalazione di TLR7 deregolata è stata implicata in fenotipi infiammatori e autoimmuni ed è spesso studiata in modelli di attivazione immunitaria sistemica e di riconoscimento dei patogeni.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO TLR7 (m) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene Tlr7 in linee cellulari mouse. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del Tlr7 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto Tlr7 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina TLR7.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di Tlr7 per lo studio della segnalazione di TLR7, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni Tlr7 critici per la funzione di TLR7
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di Tlr7 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal TLR7 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) e dal TLR7 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus Tlr7. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal TLR7 Plasmide HDR (m) e il plasmide HDR TLR7 (m2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia Tlr7 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio Tlr7 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.