TLE3 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m): sc-423414

Panoramica

Tle3 codifica il corepressore trascrizionale TLE3, un membro della famiglia Groucho/TLE che modula l’espressione genica associandosi a fattori di trascrizione specifici per la sequenza e reclutando complessi regolatori della cromatina. TLE3 partecipa a programmi di sviluppo e di determinazione del destino di linea cellulare, con ruoli di rilievo nelle reti trascrizionali legate a Wnt/β-catenina e Notch, dove può influenzare le decisioni di destino cellulare e le traiettorie di differenziamento. Nei sistemi murini, TLE3 è stato implicato nella biologia degli adipociti e nella regolazione dei geni del metabolismo, oltre che in un controllo più ampio di proliferazione e differenziamento tramite una repressione dipendente dal contesto. Programmi trascrizionali associati a TLE3 deregolati sono spesso studiati in modelli di cancro e di disturbi dello sviluppo per capire come un’alterazione della funzione di corepressore rimodelli gli output dei segnali.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO TLE3 (m) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene Tle3 in linee cellulari mouse. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del Tle3 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto Tle3 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina TLE3.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di Tle3 per lo studio della segnalazione di TLE3, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni Tle3 critici per la funzione di TLE3
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di Tle3 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal TLE3 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) e dal TLE3 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus Tle3. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal TLE3 Plasmide HDR (m) e il plasmide HDR TLE3 (m2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia Tle3 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio Tle3 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.