Non dati CRISPR: l'immagine illustra la qualità degli anticorpi per la visualizzazione dei risultati degli esperimenti CRISPR.
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TLE3 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-400386
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- TLE3 Il plasmide CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (h) è un pool di plasmidi, ciascuno dei quali codifica la nucleasi Cas9 e un RNA guida (gRNA) specifico per il bersaglio di 20 nt, progettato per la massima efficienza di knockout utilizzando sequenze derivate dalla libreria GeCKO v2
- Le sequenze gRNA indirizzano Cas9 a indurre rotture a doppio filamento (DSB) sito-specifiche nel locus genomico TLE3, con conseguente knockout genico tramite giunzione non omologa (NHEJ)
- I geni di resistenza alla puromicina e RFP sono fiancheggiati da siti LoxP, consentendo la rimozione dei marcatori di selezione tramite la ricombinasi Cre (Cre Vector: sc-418923) dopo aver stabilito linee cellulari knockout stabili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: TLE3 Antibody (D-10): sc-514798
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
TLE3 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h) | sc-400386 | 20 µg | $397.00 |
Panoramica
TLE3 (transducin-like enhancer of split 3) codifica un corepressore trascrizionale della famiglia Groucho/TLE che si lega a fattori associati al DNA come TCF/LEF, HES/HEY e altri regolatori di linea cellulare per modulare i programmi di espressione genica durante lo sviluppo e l’omeostasi dei tessuti. Reclutando complessi di modifica della cromatina, TLE3 influenza la trascrizione dipendente da Wnt/β-catenina, gli output degli effettori di Notch e ulteriori vie legate alla differenziazione. Alterazioni dell’attività di TLE3 sono state collegate a una disregolazione delle decisioni di destino cellulare, del controllo della proliferazione e della riprogrammazione trascrizionale osservata in diversi contesti patologici, inclusa la biologia dei tumori e fenotipi metabolici. Queste proprietà rendono TLE3 un bersaglio utile per analizzare il crosstalk tra vie di segnalazione e il controllo epigenetico della trascrizione dipendente dal contesto.
Il plasmide CRISPR/Cas9 KO TLE3 (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene TLE3 in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del TLE3 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.
Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto TLE3 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina TLE3.
Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di TLE3 per lo studio della segnalazione di TLE3, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.
Caratteristiche principali
- sgRNA mirati agli esoni TLE3 critici per la funzione di TLE3
Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di TLE3 per migliorare l'efficienza del knockout
Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione
Varianti di progettazione
CRISPR +/- HDR
- Gli gRNA codificati dal TLE3 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal TLE3 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus TLE3. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
I costrutti donatori HDR codificati dal TLE3 Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR TLE3 (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia TLE3 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio TLE3 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.