TIS11D Particelle di Attivazione Lentivirale (h): sc-405406-LAC

ZFP36L2 codifica la proteina legante l’RNA TIS11D, un membro della famiglia della tristetraprolina che riconosce elementi ricchi in AU negli mRNA bersaglio e ne promuove la deadenilazione e la degradazione. Attraverso il controllo post-trascrizionale di citochine, fattori di trascrizione e regolatori del ciclo cellulare, TIS11D contribuisce a modulare gli output di segnalazione a valle dell’attivazione immunitaria e dei programmi di differenziamento, incluse vie legate all’infiammazione dipendente da NF-κB e allo sviluppo dei linfociti. Un’attività disregolata di ZFP36L2 è stata associata ad alterazioni dell’omeostasi ematopoietica e delle cellule T ed è stata studiata in contesti di disfunzione immunitaria e di biologia tumorale, in cui la stabilità degli mRNA influenza proliferazione e impegno di linea.

Le particelle di attivazione lentivirale TIS11D (h) rispondono a questa esigenza incapsulando il sistema completo di attivazione trascrizionale del mediatore di attivazione sinergica (SAM) in particelle lentivirali ad alto titolo pronte per la trasduzione, consentendo un'efficiente sovraregolazione di ZFP36L2 in una gamma più ampia di tipi di cellule umane.

Le particelle di attivazione lentivirale TIS11D (h) veicolano tutti i componenti funzionali del sistema del mediatore di attivazione sinergica (SAM) tramite trasduzione lentivirale. Il sistema comprende tre preparati di particelle co-trasdotti nelle cellule bersaglio: uno che codifica per dCas9 cataliticamente inattivo (mutazioni D10A e N863A) fuso al dominio di transattivazione VP64 con un gene di resistenza alla blasticidina; una che codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1 con un gene di resistenza all'igromicina; e una che codifica un sgRNA di 20 nt specifico per il bersaglio fuso a due aptameri di RNA MS2 con un gene di resistenza alla puromicina. A seguito della trasduzione lentivirale e dell'integrazione genomica dei cassetti di espressione, i componenti del SAM vengono espressi in modo stabile e si assemblano nel locus bersaglio all'interno della regione promotrice prossimale a monte del sito di inizio della trascrizione ZFP36L2, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo cooperativo per reclutare il machinery trascrizionale endogeno e guidare una sovraregolazione sostenuta dell'espressione endogena di TIS11D. L'uso di dCas9 inattivo nei confronti delle nucleasi evita l'introduzione di rotture del DNA a doppio filamento e preserva il locus genomico nativo ZFP36L2 e l'architettura regolatoria.

Il formato lentivirale offre diversi vantaggi pratici: l'integrazione genomica stabile supporta l'attivazione ereditaria attraverso le divisioni cellulari; le preparazioni di particelle ad alto titolo eliminano la necessità di una produzione virale interna; e la compatibilità con tipi di cellule primarie, non in divisione e resistenti alla trasfezione amplia l'accessibilità sperimentale. Il successo della trasduzione può essere confermato e potenziato attraverso una selezione antibiotica tripla utilizzando puromicina, igromicina e blasticidina.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.