TIRAP Plasmide Double Nickase (m): sc-431178-NIC
- Specie Target: mouse
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- TIRAP Plasmide Double Nickase (m) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il TIRAP Double Nickase Plasmid (m) e il TIRAP Double Nickase Plasmid (m2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira Tirap. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
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| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
TIRAP Plasmide Double Nickase (m) | sc-431178-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
TIRAP Plasmide Double Nickase (m2) | sc-431178-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
Mouse Tirap codifica TIRAP (nota anche come Mal), una proteina adattatrice che collega la segnalazione dei recettori Toll-like e della famiglia del recettore dell’interleuchina-1 all’attivazione a valle delle vie di NF-κB e MAPK. TIRAP contribuisce a reclutare MYD88 su recettori quali TLR2 e TLR4 alla membrana plasmatica tramite una localizzazione dipendente dai fosfoinositidi, modulando le fasi iniziali della trasduzione del segnale dell’immunità innata. Attraverso la regolazione dell’induzione di citochine e chemochine, Tirap influenza le risposte di macrofagi e cellule dendritiche, la polarizzazione infiammatoria e le interazioni ospite–microbo. Una segnalazione dipendente da TIRAP deregolata viene studiata nel contesto di infiammazione aberrante e patologie immuno-mediate, rendendolo un nodo utile per analizzare le reti di segnalazione dei PRR.
TIRAP Il plasmide Double Nickase (m) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus Tirap nelle linee cellulari mouse. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di Tirap. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di Tirap. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con Tirap interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.