TIP39 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-405791

Panoramica

L’ormone paratiroideo 2 (PTH2) codifica il peptide tuberoinfundibolare di 39 residui (TIP39), un neuropeptide che funge da ligando endogeno del recettore dell’ormone paratiroideo 2 (PTH2R), un GPCR di classe B. La segnalazione TIP39–PTH2R è accoppiata prevalentemente alla via cAMP/PKA e può coinvolgere anche vie calcio-dipendenti, modulando l’eccitabilità neuronale e gli output neuroendocrini nei circuiti ipotalamici e limbici. Nella biologia umana, PTH2/TIP39 è stato collegato alla modulazione della nocicezione, delle risposte allo stress, della termoregolazione e del controllo dell’asse riproduttivo tramite comunicazione neuropeptidergica. La disregolazione di queste vie fornisce un contesto meccanicistico per lo studio dell’elaborazione sensoriale e dei fenotipi neuroendocrini in modelli rilevanti per la malattia.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO TIP39 (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene PTH2 in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del PTH2 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto PTH2 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina TIP39.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di PTH2 per lo studio della segnalazione di TIP39, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni PTH2 critici per la funzione di TIP39
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di PTH2 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal TIP39 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal TIP39 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus PTH2. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal TIP39 Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR TIP39 (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia PTH2 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio PTH2 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.