TIMP-1 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-400408

Panoramica

TIMP1 codifica l’inibitore tissutale delle metalloproteinasi-1 (TIMP-1), una glicoproteina secreta che si lega alle metalloproteinasi della matrice (MMP) e le inibisce per regolare il turnover della matrice extracellulare e la segnalazione proteolitica. Limitando l’attività delle MMP, TIMP-1 influenza le interazioni cellula–matrice, il rimodellamento tissutale e le risposte infiammatorie, con effetti a valle su migrazione, invasione e programmi di rimodellamento guidati dalle citochine. TIMP-1 è inoltre implicato in segnali indipendenti dalle MMP tramite interazioni con la superficie cellulare, che possono modulare, in modo dipendente dal contesto, le vie di sopravvivenza e proliferazione. Alterazioni dell’espressione di TIMP1 e dell’equilibrio TIMP-1/MMP sono spesso studiate in fibrosi, artrite, rimodellamento cardiovascolare e biologia del cancro, dove una dinamica della matrice deregolata contribuisce a fenotipi associati alla malattia.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO TIMP-1 (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene TIMP1 in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del TIMP1 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto TIMP1 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina TIMP-1.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di TIMP1 per lo studio della segnalazione di TIMP-1, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni TIMP1 critici per la funzione di TIMP-1
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di TIMP1 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal TIMP-1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal TIMP-1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus TIMP1. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal TIMP-1 Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR TIMP-1 (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia TIMP1 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio TIMP1 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.