TIF1γ Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-403230-ACT

TRIM33 (TIF1γ) codifica un coregolatore trascrizionale contenente un motivo tripartito, che integra un’attività di ubiquitina ligasi associata alla cromatina con la regolazione genica dipendente dai segnali. TIF1γ modula la segnalazione TGF-β/BMP mediata da SMAD, influenza l’allungamento trascrizionale e il rimodellamento della cromatina e partecipa alle risposte al danno del DNA tramite la regolazione di complessi proteici nucleari. Regolando finemente programmi trascrizionali specifici di linea e decisioni sul destino cellulare, TRIM33 viene studiato in contesti quali la differenziazione ematopoietica, la transizione epitelio-mesenchimale e le reti di segnalazione dello stress. Una funzione deregolata di TRIM33 e un’alterata attività della via del TGF-β sono state associate alla biologia tumorale e ad altri disturbi che coinvolgono un controllo trascrizionale aberrante.

TIF1γ Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di TRIM33 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

TIF1γ Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus TRIM33 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione TRIM33, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di TIF1γ. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus TRIM33 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da TIF1γ nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via TIF1γ nelle cellule tumorali con espressione di TRIM33 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.