Thrombospondin 5 Plasmide Double Nickase (h): sc-402797-NIC

COMP codifica la trombospondina 5, una glicoproteina pentamerica secreta della matrice extracellulare, abbondante nella cartilagine e in altri tessuti connettivi. La trombospondina 5 partecipa all’assemblaggio e all’omeostasi della matrice legandosi a collagene, proteoglicani e integrine, influenzando così l’adesione dei condrociti, la meccanotrasduzione e l’organizzazione della matrice extracellulare. Attraverso i suoi effetti sull’architettura della cartilagine e sui processi legati all’ossificazione endocondrale, COMP è associato a vie che regolano lo sviluppo scheletrico e l’integrità tissutale. L’alterazione genetica o la disregolazione di COMP è collegata a displasie scheletriche ereditarie e a fenotipi di degenerazione della cartilagine, rendendolo un bersaglio rilevante per lo studio della biologia della matrice extracellulare e dei meccanismi delle malattie del tessuto connettivo.

Thrombospondin 5 Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus COMP nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di COMP. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di COMP. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.

Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con COMP interrotto.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.