TGN38 Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-401763-ACT

TGOLN2 codifica TGN38, una glicoproteina transmembrana di tipo I arricchita nel trans-Golgi network, che funge da fattore di smistamento e trasporto per carichi di membrana e secretori. Attraverso motivi di indirizzamento citosolici e interazioni con proteine adattatrici, TGN38 contribuisce alla gemmazione delle vescicole, al riciclo dagli endosomi al TGN e al mantenimento dell’architettura del Golgi, influenzando così la maturazione proteica e l’organizzazione spaziale dei recettori di segnalazione. Questi processi collegano TGOLN2 a vie fondamentali del trasporto intracellulare, della processamento delle glicoproteine e della secrezione regolata. Un traffico di membrana e un’omeostasi del Golgi deregolati sono implicati nell’invasione delle cellule tumorali, nella neurodegenerazione e in alterazioni della segnalazione immunitaria, rendendo TGOLN2 un nodo utile per studi meccanicistici sulla dinamica degli organelli e sulla proteostasi.

TGN38 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di TGOLN2 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

TGN38 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus TGOLN2 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione TGOLN2, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di TGN38. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus TGOLN2 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da TGN38 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via TGN38 nelle cellule tumorali con espressione di TGOLN2 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.