Non dati CRISPR: l'immagine illustra la qualità degli anticorpi per la visualizzazione dei risultati degli esperimenti CRISPR.
Non dati CRISPR: l'immagine illustra la qualità degli anticorpi per la visualizzazione dei risultati degli esperimenti CRISPR.
TGFβ2 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-400496
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- TGFβ2 Il plasmide CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (h) è un pool di plasmidi, ciascuno dei quali codifica la nucleasi Cas9 e un RNA guida (gRNA) specifico per il bersaglio di 20 nt, progettato per la massima efficienza di knockout utilizzando sequenze derivate dalla libreria GeCKO v2
- Le sequenze gRNA indirizzano Cas9 a indurre rotture a doppio filamento (DSB) sito-specifiche nel locus genomico TGFβ2, con conseguente knockout genico tramite giunzione non omologa (NHEJ)
- I geni di resistenza alla puromicina e RFP sono fiancheggiati da siti LoxP, consentendo la rimozione dei marcatori di selezione tramite la ricombinasi Cre (Cre Vector: sc-418923) dopo aver stabilito linee cellulari knockout stabili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: TGFβ2 Antibody (H-6): sc-374659
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
TGFβ2 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h) | sc-400496 | 20 µg | $397.00 |
Panoramica
TGFB2 codifica il transforming growth factor beta 2 (TGFβ2), una citochina secreta che trasmette il segnale attraverso le chinasi recettoriali della famiglia TGF-β a serina/treonina per attivare la trascrizione dipendente da SMAD2/3 e interagire con vie non canoniche quali MAPK, PI3K/AKT e le GTPasi di tipo Rho. TGFβ2 è un regolatore chiave del rimodellamento della matrice extracellulare, della transizione epitelio-mesenchimale, della modulazione immunitaria e delle decisioni sul destino cellulare durante lo sviluppo e l’omeostasi tissutale. Una segnalazione di TGFB2 deregolata è stata associata a fibrosi, riparazione anomala delle ferite e interazioni tumore–stroma, rendendola rilevante per studi su fenotipi guidati dal microambiente. Nei modelli cellulari umani, la perturbazione di TGFB2 supporta l’analisi meccanicistica della dinamica della via del TGF-β e dei programmi di regolazione genica a valle.
Il plasmide CRISPR/Cas9 KO TGFβ2 (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene TGFB2 in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del TGFB2 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.
Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto TGFB2 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina TGFβ2.
Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di TGFB2 per lo studio della segnalazione di TGFβ2, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.
Caratteristiche principali
- sgRNA mirati agli esoni TGFB2 critici per la funzione di TGFβ2
Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di TGFB2 per migliorare l'efficienza del knockout
Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione
Varianti di progettazione
CRISPR +/- HDR
- Gli gRNA codificati dal TGFβ2 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal TGFβ2 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus TGFB2. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
I costrutti donatori HDR codificati dal TGFβ2 Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR TGFβ2 (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia TGFB2 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio TGFB2 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.