TFPI-2 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-417987

Panoramica

TFPI2 codifica il Tissue Factor Pathway Inhibitor 2 (TFPI-2), un inibitore secretato delle serin-proteasi di tipo Kunitz che modula la proteolisi pericellulare all’interno della matrice extracellulare. Inibendo proteasi coinvolte nel rimodellamento della matrice e nell’attività proteasica associata alla coagulazione, TFPI-2 influenza l’adesione cellulare, la migrazione, l’invasione e l’omeostasi tissutale. L’attività di TFPI-2 si interseca con reti extracellulari di proteasi legate alla regolazione delle metalloproteinasi della matrice e alla segnalazione correlata alla trombina, plasmando l’equilibrio tra attivazione e inibizione proteolitica nel microambiente tumorale e in contesti vascolari. Un’espressione deregolata di TFPI2 è stata associata a un turnover anomalo della matrice extracellulare e a fenotipi invasivi alterati in molteplici modelli rilevanti per la malattia, supportandone l’utilizzo come nodo meccanicistico negli studi dei processi legati alla metastasi.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO TFPI-2 (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene TFPI2 in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del TFPI2 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto TFPI2 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina TFPI-2.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di TFPI2 per lo studio della segnalazione di TFPI-2, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni TFPI2 critici per la funzione di TFPI-2
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di TFPI2 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal TFPI-2 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal TFPI-2 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus TFPI2. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal TFPI-2 Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR TFPI-2 (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia TFPI2 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio TFPI2 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.