TFIIIB90-1 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-405826

Panoramica

BRF1 codifica la subunità TFIIIB90-1 del fattore di trascrizione IIIB, un componente centrale della macchina di inizio della RNA polimerasi III, necessaria per la trascrizione di tRNA, rRNA 5S e altri piccoli RNA non codificanti. Attraverso l’assemblaggio con TBP e BDP1 sui promotori della Pol III, TFIIIB90-1 favorisce l’interazione con la cromatina, la formazione del complesso di pre-inizio e la regolazione della capacità di traduzione cellulare e dei programmi di crescita. L’output della Pol III è strettamente accoppiato al sensing dei nutrienti e alla segnalazione proliferativa, collegando la funzione di BRF1 alla biogenesi dei ribosomi, alla proteostasi e all’adattamento allo stress. Una trascrizione Pol III deregolata e un’attività alterata di TFIIIB sono spesso associate a stati oncogenici e ad altri disturbi caratterizzati da una domanda biosintetica anomala e da un controllo del ciclo cellulare alterato.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO TFIIIB90-1 (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene BRF1 in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del BRF1 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto BRF1 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina TFIIIB90-1.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di BRF1 per lo studio della segnalazione di TFIIIB90-1, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni BRF1 critici per la funzione di TFIIIB90-1
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di BRF1 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal TFIIIB90-1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal TFIIIB90-1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus BRF1. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal TFIIIB90-1 Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR TFIIIB90-1 (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia BRF1 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio BRF1 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.