TFIIH p89 Plasmide Double Nickase (h): sc-401124-NIC
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- TFIIH p89 Plasmide Double Nickase (h) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il TFIIH p89 Double Nickase Plasmid (h) e il TFIIH p89 Double Nickase Plasmid (h2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira ERCC3. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: TFIIH p89 Antibody (G-10): sc-271500
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
TFIIH p89 Plasmide Double Nickase (h) | sc-401124-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
TFIIH p89 Plasmide Double Nickase (h2) | sc-401124-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
ERCC3 codifica TFIIH p89 (XPB), un’ATPasi DNA-dipendente e un’elicasi 3′→5′, componente centrale del complesso TFIIH che accoppia l’inizio della trascrizione basale da parte dell’RNA polimerasi II con la riparazione per escissione di nucleotidi (NER). Svolgendo il DNA del promotore e il DNA contenente lesioni durante la NER accoppiata alla trascrizione e la NER dell’intero genoma, TFIIH p89 contribuisce a coordinare l’integrità del genoma, la progressione del ciclo cellulare e le risposte ai danni indotti dai raggi UV. L’alterazione della funzione di ERCC3 compromette l’omeostasi trascrizionale e la capacità di riparazione del DNA, collegando i difetti di ERCC3 a sindromi ereditarie di riparazione del DNA come lo xeroderma pigmentoso e la tricotiodistrofia. In quanto componente di TFIIH, TFIIH p89 è spesso studiata nei meccanismi di regolazione della trascrizione, nello stress replicativo e nelle vie della mutagenesi.
TFIIH p89 Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus ERCC3 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di ERCC3. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di ERCC3. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con ERCC3 interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.