TFIIH p62 Plasmide Double Nickase (h): sc-402239-NIC
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- TFIIH p62 Plasmide Double Nickase (h) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il TFIIH p62 Double Nickase Plasmid (h) e il TFIIH p62 Double Nickase Plasmid (h2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira GTF2H1. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: TFIIH p62 Antibody (H-10): sc-25329
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
TFIIH p62 Plasmide Double Nickase (h) | sc-402239-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
TFIIH p62 Plasmide Double Nickase (h2) | sc-402239-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
GTF2H1 codifica TFIIH p62, una subunità essenziale del complesso TFIIH che accoppia l’inizio della trascrizione da parte dell’RNA polimerasi II con la riparazione per escissione di nucleotidi (NER). Attraverso interazioni con altri componenti di TFIIH, p62 contribuisce all’apertura del promotore e supporta la verifica del danno al DNA e la riparazione durante la NER dell’intero genoma e quella accoppiata alla trascrizione. Queste funzioni si integrano con il controllo trascrizionale di base, la segnalazione della risposta al danno al DNA e il mantenimento della stabilità del genoma. L’alterazione dell’attività di TFIIH è implicata in disturbi caratterizzati da difetti di riparazione del DNA e disregolazione trascrizionale, inclusi sindromi nello spettro xeroderma pigmentosum–Cockayne e la tricotiodistrofia.
TFIIH p62 Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus GTF2H1 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di GTF2H1. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di GTF2H1. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con GTF2H1 interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.